تولید پیلی نوترکیب باکتری ویبریو کلرا و ارزیابی آنتی ژنیسیته آن

مقدمه : یکی از مهمترین فاکتورهای بیماری زای باکتری پیلی هم تنظیم شونده با توکسین (tcp) است. این پیلی به عنوان اولین فاکتور در کلونیزاسیون و تداوم باکتری ها در روده کوچک مورد نیاز است. باکتری پیلی هم تنظیم شونده با توکسین به صورت پیلی تشکیل دهنده دسته ای است که به شکل هماهنگ با توکسین کلرا(ct) تنظیم می شود. توکسین کلره به عنوان بخشی از ژنوم باکتریوفاژ رشته ای (ctxq) است به طوری که این باکتریوفاژ از پیلی هم تنظیم شونده با توکسین به عنوان رسپتور خود استفاده می کند. هدف از این مطالعه تولید یک واکسن نوترکیب برای ویبریو کلره در آینده است. مواد وروش کار : در این تحقیق با استفاده ازروش pcr، ژن پیلی هم تنظیم شونده با توکسین از ویبریوکلرا تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن های فوق در ناقل های پلاسمیدی pet32a وpgex4t-1 جهت بیان کلون شدند. سپس ساختارهای پلاسمیدی نوترکیب وارد میزبان هایی از باکتری اشریشیا کلی شدند. تولید پروتئین ها توسط iptg القاء و بهینه سازی شرایط محیط کشت صورت گرفت. پروتئین های نوترکیب با استفاده از کیت های ni-nta وgst خالص و آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین های نوترکیب انجام گرفت. میزان پروتئین ها با استفاده از روش براد فورد اندازه گیری شد. نتایج: نتایج تحقیق حاضر بیان موفقیت آمیزی از پروتئین های نوترکیب در دو سلول میزبان از سویه های اشرشیاکلی مانندe-coli bl21(dh3) plyss و e-coli bl21(dh3)را ثابت کرد. پروتئین های نوترکیب بوسیله کروماتوگرافی تمایلی ((ni-nta/gst) تخلیص شدند. الگوی واکنش این پروتئین ها با آنتی بادی های ضد آن ها، نشان داد که این پروتئین ها خاصیت آنتی ژنیک دارند. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده از این مطالعه نشان داد ،پروتئین های نوترکیب بدست آمده از پیلی هم تنظیم شونده با توکسین که به عنوان مهمترین فاکتور ویرولانس در باکتری ویبریوکلرا به حساب می آید، بوسیله وکتورهای مناسبی مانند pgex4t-1و pet32aتولید شد. در کشور ایران، طی چند سال اخیر مراقبت های بهداشتی به شکل چشمگیری افزایش پیدا کرده است، علی الرغم این تلاش ها هنوز در مناطق مختلفی از کشور شیوع هایی از این بیماری دیده می شود. از آنجا که در این مطالعه نشان داده شد، این پروتئین ها دارای خاصیت آنتی ژنیسیته هستند، ممکن است به عنوان کاندید جهت طراحی واکسیناسیون باکتری ویبریوکلرا در نظر گرفته شوند. واژگان کلیدی: ژن پیلی هم تنظیم شونده با توکسین، ویبریو کلرا، واکنش زنجیره ای پلی مراز، پروتئین نوترکیب، اشریشیا کلی.